GB 478914-2014 英文版

　　GB 4789.14-2014: 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验

　　本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）的检验方法。

　　本标准第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品中蜡样芽胞杆菌的计数；第二法适用于蜡样芽胞杆

　　用接种环从各管中分别移取 1 环，划线接种到 MYP 琼脂平板上，30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。如果菌

　　从每个平板选取 5个典型菌落（小于 5个全选），划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30 ℃±1 ℃培

　　根据证实为蜡样芽胞杆菌阳性的试管管数，查 MPN 检索表（见附录 B），报告每 g（mL）样品中

　　稀释液：取贮存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压灭菌 15 min。

　　将 A.2.1 前五种成分加入于 950 mL 蒸馏水中，加热溶解，校正 pH 至 7.3±0.1，加入酚红溶液。分装，

　　每瓶 95 mL，121 ℃高压灭菌 15 min。临用时加热溶化琼脂，冷却至 50 ℃，每瓶加入 50%卵黄液 5 mL

　　和浓度为 10000 IU 的多黏菌素 B 溶液 1 mL，混匀后倾注平板。

　　取鲜鸡蛋，用硬刷将蛋壳彻底洗净，沥干，于 70%酒精溶液中浸泡 30 min。用无菌操作取出卵黄，

　　将 A.3.1 前五种成分加入于蒸馏水中，加热溶解，校正 pH 至 7.3±0.2，121 ℃高压灭菌 15 min。临

　　用时加入多黏菌素 B 溶液混匀即可。多黏菌素 B 溶液制法同附录 A.2.2.2。

　　将 A.4.1 所述成分溶解于蒸馏水内，校正 pH 至 7.2±0.2，加热使琼脂溶化。121℃高压灭菌 15 min，备用。

　　用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落, 置于洁净试管内，滴加 3%过氧化氢溶液 2 mL，观察结果。

　　用接种针挑取培养物穿刺接种于动力培养基中，30 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。蜡样芽胞杆菌应沿穿刺

　　线呈扩散生长，而蕈状芽胞杆菌常常呈绒毛状生长，形成蜂巢状扩散。动力试验也可用悬滴法检查。蜡

　　接种后在 36 ℃±1 ℃培养 24 h～72 h。加甲液和乙液各 1 滴，观察结果，阳性反应立即或数分钟内

　　显红色。如为阴性，可再加入锌粉少许，如出现红色，表示硝酸盐未被还原，为阴性。反之，则表示硝酸盐已被还原，为阳性。

　　A.12.2.1 糖发酵管按A.12.1所述成分配好后，校正pH至7.2±0.2，按0.5 %加入葡萄糖，分装于一个有倒

　　将各种糖类分别配好10 %溶液，同时115℃高压灭菌15 min。将5 mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

　　挑取可疑菌落接种于葡萄糖发酵管中，厌氧条件下36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。培养基由红色变为黄